Introducción
 La Medicina Tradicional China (MTC) se basa en evidencia empírica y en manuscritos de medicinas tradicionales. Antes de que la teoría y los medicamentos de la MTC comiencen a utilizarse de forma más amplia en otros sistemas médicos (en particular en la medicina biomédica occidental), es necesario realizar investigaciones para entender las bases bioquímicas del sistema de clasificación de los fármacos en MTC y su mecanismo de acción. En una publicación reciente, Ou y cols. (1) establecieron una estrecha relación entre la actividad antioxidante in vitro y la clasificación de las hierbas chinas según el yin y el yang.
A lo largo de su extenso desarrollo, la MTC ha asimilado la quintaesencia de la filosofía, la cultura y la ciencia clásica china, y ha sintetizado la experiencia del pueblo chino en la lucha contra las enfermedades (2). La evidencia empírica como base de la MTC ha evolucionado hacia el desarrollo de una teoría médica totalmente diferente de la teoría médica occidental convencional (3). La MTC considera que las diferentes características de las hierbas utilizadas para tratar las enfermedades son capaces de corregir la hiper o hipoactividad del yin o del yang y ayudar al organismo a restaurar sus funciones fisiológicas normales. Las hierbas poseen cuatro naturalezas y cinco sabores. Las cuatro naturalezas (fría, caliente, tibia y fresca) se determinaron principalmente a través de la respuesta del organismo después de haber ingerido las hierbas chinas, definiéndose así sus propiedades según el carácter frío o caliente de las enfermedades tratadas. Además, existen algunas hierbas conocidas como neutras, cuya naturaleza fría o caliente no es significativa,y cuyo efecto es relativamente moderado. Sin embargo, estas hierbas presentan una diferencia en su tendencia a refrescar o calentar, de modo que se incluyen también en la teoría de las cuatro naturalezas. Los cinco sabores son: picante, dulce, ácido, amargo y salado, de forma similar al gusto que se puede notar en la lengua. Con el desarrollo de la teoría de las propiedades medicinales, los sabores podrían describirse mejor según conceptos más abstractos, ya que las definiciones de los sabores han surgido más de las observaciones de los efectos clínicos de las hierbas que de la sensación gustativa per se.
La mayoría de las hierbas contiene una combinación de varios sabores, como por ejemplo “amargo con dulce y picante” (4). La naturaleza y el sabor son dos tipos de propiedades medicinales que poseen todas las hierbas chinas. La investigación científica moderna ha se ha interesado por las cuatro naturalezas desde 1960, principalmente en China y Japón. Existen dos líneas principales de investigación sobre las cuatro naturalezas. La primera es la investigación farmacodinámica, que explora el efecto de las hierbas de naturaleza fría y caliente en la neurotransmisión en el sistema nervioso central, el sistema simpático suprarrenal, el sistema de las prostaglandinas y el sistema endocrino. La segunda es una investigación de las sustancias implicadas, entre las que se incluyen los componentes químicos y especialmente las trazas (Nota: las trazas de un compuesto o molécula representan la presencia de dicho elemento o molécula a concentraciones extremadamente pequeñas, prácticamente indetectables) (5). Algunas investigaciones innovadoras proceden de la biofísica y de la bioquímica, y estudiaron la naturaleza de las hierbas Radix ginseng, Folium ginseng, Flos ginseng y Radix quinquefolium mediante el método de la microcalorimetría (6-8).
Se observaron los efectos de las cuatro naturalezas de 60 hierbas chinas sobre los órganos y tejidos de ratones IRC/F1 mediante 14C-2-desoxi-glucosa y autorradiografía. Los resultados mostraron que las cuatro naturalezas presentaban efectos diferentes sobre los órganos y los tejidos (9). En comparación con los estudios sobre las naturalezas, la investigación sobre los sabores en China se ha centrado más en la relación entre los componentes químicos y los diferentes sabores (especialmente el concepto abstracto del sabor), así como en las acciones farmacológicas de los principales componentes (4,10). Es interesante observar que en un artículo enviado recientemente a la revista Nature se relacionan las actividades farmacológicas del Ibuprofeno y del Oleocanthal con la similitud de su sabor (11).
Las hierbas de diferentes naturalezas y sabores muestran efectos diferentes y se clasifican de manera distinta en términos de yin y Yang (12). Las hierbas chinas se clasifican también principalmente en base a sus funciones en la teoría y en la práctica clínica. En el caso de las hierbas relacionadas con la circulación analizadas en este estudio, las clasificaremos como (12,13) función 1 (fármacos cuyos efectos principales son de detener el sangrado tanto interno como externo)función 2 (medicamentos que facilitan el libre flujo de la sangre en los vasos, promueven la circulación sanguínea y deshacen la estasis sanguínea, función 3 (fármacos que nutren la sangre y están indicados para los síndromes de deficiencia de sangre) y función 4 (fármacos capaces de disipar el exceso de calor del sistema sanguíneo. Estas teorías constituyen los fundamentos para el análisis y la aplicación clínica de estas hierbas chinas.
El reciente estudio realizado por Ou y cols. (1) sobre la capacidad antioxidante se basa en 24 plantas medicinales comercializadas. Se constató la existencia de una relación significativa entre la capacidad antioxidante in vitro y la clasificación yin-yang de las hierbas. Así, las hierbas yang tenían valores antioxidantes más bajos y las hierbas Yin valores más altos.
Es un hecho reconocido que las terapias antioxidantes son útiles en muchas enfermedades. El daño celular derivado de un desequilibrio entre la generación de radicales libres y los sistemas de eliminación está implicado en la patogénesis de un amplia gama de trastornos, incluyendo la enfermedad cardiovascular, el cáncer y el proceso de envejecimiento (14). Se ha demostrado que muchas hierbas chinas tienen efectos antioxidantes (15,16). Para explorar más a fondo la naturaleza antioxidante de las hierbas chinas y evaluar la relación entre la capacidad antioxidante y la caracterización de las hierbas en MTC, investigamos el efecto antioxidante de 45 hierbas extraídas mediante agua.
Métodos
Productos Químicos y dispositivos utilizados
Se obtuvieron Trolox (6-hidroxi-2, 5, 7, 8-tetrametil-2-carboxylicacid, un homólogo hidrosoluble de la vitamina E) y fluoresceína (30, 60-dihidroxi-espiro [isobenzofurano-1 (3H), 90 (9H)-xanten]-3-1 disódico; FL) de Aldrich (Castle Hill, NSW, Australia). Se adquirió AAPH (20-azobis (2) amidinopropane diclorhidrato) a Wako Pure Chemical EEUU (Richmond, VA, EEUU). Las 96-microplacas de poliestireno fueron proporcionadas por PerkinElmer Life and Analytical Sciences. Todos los análisis CARO se realizaron con lector Victor de 2 placas (Wallac).
Muestras
Las muestras para este estudio fueron adquiridas en el Hospital Provincial Popular de Shanxi. Las hierbas fueron identificadas por el Departamento para la Supervisión de la Materia Médica de la provincia de Shanxi, y las muestras fueron almacenadas a temperatura ambiente (10-20ºC) en recipientes herméticos etiquetados. Las hierbas fueron secadas mediante vacío de alta intensidad hasta alcanzar un peso constante y posteriormente pulverizadas. Las hierbas secas (3 g) se colocaron en tubos de centrifugadora (20 ml) y se mezclaron con agua (10 ml). Después de 2 horas a temperatura ambiente en un agitador mecánico y 15 minutos en baño de limpieza por ultrasonidos, los extractos fueron centrifugados (5000 g, 10 min) y se apartaron los sobrenadantes. Éstos se secaron mediante vacío de alta intensidad y fueron almacenados a 0ºC. Los extractos secos se volvieron a disolver en agua a una concentración adecuada para los diferentes ensayos.
El ensayo CARO
El ensayo se basó en el de Ou y cols. (17). Las muestras de extractos secos se disolvieron en agua, y se realizó una triple prueba a concentraciones de 12,5, 25, 50 y 100 mg de extracto/litro. En particular, se incubaron 20 µl de la muestra o Trolox incubaron con 10 ml de 75nM fluoresceína y 170 ml de 17mm AAPH en un volumen total de 200 ml. Todos los análisis de ORAC se realizaron a una temperatura de 37ºC con una longitud de onda de excitación de 485nm y una longitud de onda de emisión de 535 nm. El área bajo la curva de disminución de la fluorescencia para FL (ABC) fue calculada por integración punto a punto. La disminución de la fluorescencia fue seguido en intervalos de 1 min durante 35 min. El efecto protector antioxidante se midió mediante la comparación del ABC de la muestra con la del antioxidante conocido Trolox, un análogo hidrosoluble de la vitamina E. Los valores finales del CARO se expresaron en micromoles equivalentes Trolox por gramo de hierba seca (µmol TE/g). Se evaluó cada muestra por triplicado a cuatro concentraciones diferentes. Los resultados se expresaron como media (DS < 10%).
Resultados
Valor CARO de 45 hierbas chinas
En este ensayo se analizó la actividad antioxidante de 45 hierbas chinas que regulan la circulación sanguínea (Tabla 1 y Tabla 2). Los resultados pusieron de manifiesto la presencia de actividad antioxidante de intensidad variable en función de un amplio rango.
Las hierbas con mayor actividad antioxidante fueron caulis Spatholobus suberectus (1990 TE µmol/g) y radix Sanguisorba officinalis (1940 TE µmol/g). La capacidad antioxidante de caulis Spatholobus suberectus (1990 TE µmol/g) fue 50 veces superior a la de fructus Ziziphus jujuba (40 µmol TE/g).
|
|
|
|
|
|
|
|
haz clic sobre el nombre o la imagen para verlas al tamaño original |
Comparación de los valores CARO de las hierbas de naturaleza, sabor y funciones diferentes
Las hierbas con un sabor amargo tienen un valor CARO superior al de las hierbas con otros sabores (Tabla 3). La media de los valores CARO de las hierbas con sabor amargo y/o ácido fue de 856 µmol TE/g, es decir, cuatro veces superior al de las hierbas con sabor dulce y/o picante (213 µmol TE/g) (P50.01). Diez hierbas obtuvieron valores CARO superiores o similares al de la vitamina E. La Figura 1 desglosa la clasificación según los sabores para estas 10 hierbas .
Discusión
El análisis de los valores CARO se ha convertido en un método eficaz y popular para medir la capacidad antioxidante o de neutralización de los radicales en muestras biológicas. Una tendencia ha sido investigar una variedad de plantas como nuevas fuentes potenciales de antioxidantes. Muchos fotoquímicos, como la quercetina, que pertenece a un grupo de polifenoles conocidos como flavonoides y que tienen una importante actividad antioxidante, tienen actividad antioxidante y pueden ayudar a proteger las células contra la oxidación y los daños causados por los radicales libres (18).
La investigación sobre las propiedades antioxidantes de las hierbas puede proporcionar información sobre el mecanismo de acción de los extractos de plantas, la utilidad de los fármacos para mitigar el daño oxidativo y ayudar a identificar la presencia de determinados componentes antioxidantes. En este ensayo se analizó la actividad antioxidante de 45 hierbas chinas que regulan la circulación sanguínea.
Los resultados mostraron que existe una gran variedad en la actividad antioxidante.
La capacidad antioxidante de caulis Spatholobus suberectus (1990 TE µmol/g) es 50 veces superior a la de fructus Ziziphus jujuba (40 µmol TE/g).
Una diferencia entre el protocolo utilizado y el empleado por Ou y cols. (13) es que se utilizaron extractos preparados por el método tradicional de extracción con agua, mientras que en el estudio mencionado anteriormente se utilizó extracción con acetona al 70%. El presente estudio se centra en la forma utilizada en clínica, en general preparada con agua que sigue siendo la modalidad más ampliamente utilizada en la actualidad. Otra diferencia es que en la selección de las 45 hierbas se tomaron en cuenta también las propiedades farmacológicas antiguas (naturalezas, sabores y funciones y la relación de estas propiedades con la actividad antioxidante). Una combinación entre los valores CARO, naturaleza, sabor, funciones y la teoría del Yin y el Yang sería útil para la selección de las mejores hierbas para conseguir una aplicación terapéutica óptima.
Las hierbas chinas se caracterizan según su naturaleza y su sabor. En el tratado de medicina más antiguo disponible en China, el Huangdi Neijing (19), el sabor picante dispersa, el sabor dulce nutre y estos sabores pertenecen al Yang. El sabor ácido astringe, el sabor amargo purga, el sabor salado humedece, los sabores ácido, amargo y salado pertenecen al Yin. Para las diferentes naturalezas, el Huangdi Neijing da la siguiente información: las naturalezas fría y fresca pertenecen al Yin, las naturalezas caliente y tibia pertenecen al Yang. Sin embargo el carácter Yin y Yang de las cosas es relativo, no es absoluto. Numerosas hierbas disponen de dos o más sabores a veces opuestos, en estos casos se trata del Yin dentro del Yang o del Yang dentro del Yin. Fármacos con sabores y naturalezas diferentes, composiciones diferentes muestran acciones farmacológicas y terapéuticas distintas.
En la Tabla 3, se comparan los valores CARO de hierbas con distintas naturalezas, sabores, funciones y las propiedades Yin/Yang atribuidas a los subgrupos. El sabor amargo y/o ácido pertenecen al Yin y los sabores dulce y/o picante pertenecen al Yang. Para los diferentes sabores existe una diferencia significativa en los valores de su capacidad antioxidante. Hierbas con sabor amargo presentan valores CARO superiores a los sabores picante y/o dulce. La media de valores CARO de las hierbas de sabor amargo y/o ácido es de 856 µmol TE/g, es decir cuatro veces más elevada que la media de las hierbas de sabor dulce y/o picante (213 µmol TE/g). El valor CARO más alto es de 1940 µmol TE/g, es decir, tres veces más alto que el valor más elevado en los grupos de sustancias de sabor dulce y/o picante (640 µmol TE/g). En la Figura 1, de las 10 hierbas que presentan valores CARO superiores o similares a los de la vitamina E (1162 µmol TE/g) (20), un 60% tiene un sabor amargo y/o ácido (Yin). Nueve de estas 10 hierbas presentan un componente de sabor amargo. El sabor amargo tiene como funciones de secar y eliminar la humedad, descender el qi rebelde y purgar el calor. Estas hierbas de sabor amargo se utilizadan ampliamente. El síndrome de calor-humedad es el síndrome asociado principalmente a la utilización clínica de las hierbas de sabor amargo.
Se desarrolló un modelo animal para el estudio del síndrome de calor-humedad en base a múltiples factores (dieta, clima y factores patogénicos biológicos) (21,22). El estudio mostró que la actividad de la super-óxido dismutasa (SOD) disminuyó y que el malonildialdehído (MDA) aumentó marcadamente en células rojas en animales con síndrome de calor-humedad. La investigación clínica encontró un desequilibrio entre la oxidación y antioxidación en sujetos con síndrome de calor-humedad. La actividad antioxidante en el suero sanguíneo en el grupo con calor-humedad era inferior al del grupo de sujetos sanos y el grupo de sujetos sin síndrome de calor-humedad. (23). De las hierbas estudiadas, se sabe que Lycopus lucidus se utiliza para estimular la circulación sanguínea, estimular la diuresis y aliviar el edema (según la teoría de la MTC, el edema se relaciona con la humedad). Salvia miltiorrhiza se utiliza para estimular la circulación sanguínea y deshacer la estasis de sangre, enfriar la sangre para aliviar los carbuncos, disipar el calor del corazón y calmar la mente. Sanguisorba officinalis,
Sophora japonica y Nelumbo nucifera se utilizan para enfriar la sangre y deterner el sangrado. Todas comparten un sabor amargo y presentan valores CARO elevados. El mecanismo de acción de las hierbas con sabor amargo para disipar el calor y eliminar la humedad podría relacionarse con su mayor actividad antioxidante.
Los componentes fenólicos o flavonoides están reconocidos como potentes antioxidantes (24). Algunos estudios han mostrado que los componentes activos de las hierbas Yin son principalmente flavonoides que son componentes fenólicos con una actividad antioxidante importante (13). Se ha comprobado que las tres hierbas con mayor actividad antioxidante en el presente estudio, es decir, Spatholobus suberectus, Sanguisorba officinalis y Agrimonia pilosa contienen flavonoides (25-27). Los futuros estudios sobre los compuestos con una actividad antioxidante en las sustancias amargas deberían proporcionarnos una mejor comprensión de los sabores definidos antiguamente, y especialmente del concepto abstracto de los sabores, a un nivel molecular. En primer lugar, se debería examinar a fondo los sentidos del gusto y del olfato por separado y luego combinarlos con las técnicas modernas investigaciones de investigación. En el caso de los receptores del olfato, moléculas de un tamaño y de una forma determinada activan el receptor, mientras que en el caso de los receptores del gusto puede que esté implicada un reactividad química más específica. ¿Cómo abordar la cuestión de la combinación del gusto y del olfato en la definición antigua de los sabores y la investigación moderna sobre la actividad antioxidante? Podría tratarse de un enfoque innovador (11).
Sin embargo, utilizando un análisis similar se esperaba que la naturaleza refrescante y la función nº4 (disipar el calor patógeno del sistema sanguíneo) tuvieran en común un alto porcentaje de propiedades antioxidantes, pero no fue este el resultado obtenido. Las naturalezas están también relacionadas con la clasificación de Yin y de Yang. En este estudio, las hierbas utilizadas para el enfriamiento o el calentamiento, por lo que la designación Yin y Yang de sus cacterísticas no fue diferente en relación a sus propiedades antioxidantes.
En general, los resultados del estudio confirman los resultados obtenidos por Ou y cols., y proporcionas algunas respuestas sobre las cuatro naturalezas y los cinco sabores, esto es, el sabor amargo (que pertenece al Yin) presenta un valor antioxidante elevado. Es evidente que un parámetro farmacológico in vitro único para 45 hierbas no es concluyente para establecer la actividad antioxidante y su relación con sus características en MTC y la demarcación entre el yin y el yang no es tan clara en este estudio como en la publicación de Ou y cols. Se atribuye esta diferencia a los criterios de inclusión de los fármacos, ya que está basada en la condición de su aplicación en el sistema circulatorio, mientras que en el estudio anterior se seleccionaron plantas y animales con una polaridad Yin y Yang opuesta.
Estos datos a favor de las teorías tradicionales sobre los fármacos y el estudio de los mecanismos de acción constituyen una temática recurrente en la investigación sobre productos naturales, y representan un incentivo para que la investigación biomédica respalde la contribución y la utilización de este tipo de medicina.
Journals Subscription Department
Oxford University Press
Great Clarendon Street
Oxford, OX2 6DP, UK
Tel: +44 (0)1865 353907 begin_of_the_skype_highlighting +44 (0)1865 353907 end_of_the_skype_highlighting
Fax: +44 (0)1865 353485
Consejo Editorial de eCAM
www.oxfordjournals.org/ecam/edboards.html
Referencias:
1. Ou B, Huang D, Hampsch-Woodill M, Flanagan JA. When east meets west: the relationship between yin-yang and antioxidationoxidation. FASEB J. 2003;17:127–29.
2. Wu CG, Zhu ZB. Basic Theory of Traditional Chinese Medicine. Shanghai: Publishing House of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2002, 23–4.
3. Giordano J, Boatwright D, Stapleton S. Blending the boundaries: Steps towards an interpretation of Complementary and Alternative Medicine into mainstream practice. J Altern Complement Med
2002;6:897–906.
4. Chen Q. Pharmacological Research Method of Chinese Medicine. Beijing: People’s Sanitation Publishing House, 1994, 201.
5. Yu HM, Zhou HZ, Xiao XH, Liu TS, Yuan HL, Zhao YL. Advances and prospects of Four Properties of Chinese Traditional Medicine. Chin J Basic Med TCM 2001;8:61–4.
6. Yu HM, Liu TS, Xiao XH, Zhao YL, Yuan HL, Gao XS. Biothermodynamic study on Four Properties of Chinese Traditional Medicine-Comparison of the Properties of Radix ginseng and Radix
quinquefolium by Microcalorimetry. Chin J Basic Med TCM 2001;11:60–4.
7. Yu HM, Xiao XH, Liu TS, Zhao YL, Yuan HL, Tan AM. Biothermodynamic study on four therapeutic features of TCM a Comparison of therapeutic features of Folium ginseng and Flos ginseng by microcalorimetry. Chin Trad Herbal Drugs 2001;10:910–13.
.8. Wadso I. Microcalorimetric techniques for characterization of living cellular systems. Will there by any important practical applications? Thermochimica Acta 1995;269–70:337–50.
9. Yu ZY, Wang B, Lu Y. Initial quest for the function transformation of organs and tissues caused by Four Properties of Chinese Materia Medica. Shanghai J TCM 2006;4:1–3.
10. Sheng L. The relationship between Herb’s 4 Natures and 5 Flavors. Modern J Integrated TCM and Western Med 2004;11:2804–06.
11. Joshi K, Hankey A, Patwardhan B. Traditional phytochemistry: identification of drug by ‘Taste’. Evid Based Complement Alternat Med 2007;4:145–48.
12. Tang DC. Science of Chinese Materia Medica. Shanghai: Publishing House of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2003, 2–235.
13. Chinese Pharmacopoeia. Beijing: Chemical Industry Publishing House, 2005.
14. Mantle D, Wilkins RM, Gok MA. Comparison of Antioxidant Activity in Commercial Ginkgo biloba Preparations. J Altern Complement Med 2003;5:625–29.
15. Ichikawa H, Konishi T. In vitro antioxidant potentials of traditional Chinese medicine, Shengmai San and their relation to in vivo protective effect on cerebral oxidative damage in rats. Biol Pharm Bull 2002;25:898–903.
16. Chan P, Tomlinson B. Antioxidant effects of Chinese traditional medicine: focus on trilinolein isolated from the Chinese herb sanchi (Panax pseudoginseng). J Clin Pharmacol 2000;40:457–61.
17. Ou B, Hampsch-Woodill M, Prior RL. Development and validation of an improved oxygen radical absorbance capacity assay using fluorescein as the fluorescent probe. J Agric Food Chem 2001;49:4619–26.
18. Capodice JL, Bemis DL, Buttyan R, Kaplan SA, Katz AE. Complementary and Alternative Medicine for chronic prostatitis/ chronic pelvic pain syndrome. eCAM 2005;2:495–501.
19. Zhu M. Huangdi’s Canon of Medicine (Huangdi Neijing). Beijing: Publishing House of Beijing Foreign Languages, 2000, 12–236.
20. Huang D, Ou B, Hampsch-Woodill M, Flanagan JA, Deemer EK. Development and validation of oxygen radical absorbance capacity assay for lipophilic antioxidants using randomly methylated b-cyclodextrin as the solubility enhancer. J Agric Food Chem 2002;50:1815–21.
21. Wu SJ, Yang YG, Yang QH, Dong L, Liu L, Chen JH. Preparation on the wetness-heat animal model of seasonal febrile disease and discussion on the mechanism of clearing heatness and removing wetness method. Chin J Trad Med Sci Tech 1999;6:65.
22. Wang J, Chen YH, Zhao ZL. Produce animal model on wetnessheatness syndrome of seasonal febrile disease. Pharm J Chin PLA 2002;4:209–11.
23. Sun JM, Zhang LM. The function and rebuild of imbalance between oxidation and antioxidation of bronchitis patients with damp - heat syndrome. J Jianghan Univ (Med) 1997;1:3–5.
24. Samane S, Noe¨ l J, Charrouf Z, Amarouch H, Haddad PS. Insulinsensitizing and anti-proliferative effects of Argania spinosa seed extracts. eCAM 2006;3:317–27.
25. Cui YJ, Liu P, Chen RY. Studies on the chemical constituents of Spatholobus suberectus dunn. Acta Pharm Sinica 2002;37:784–87.
26. Fang GZ, Wang HJ, Sun XY. Extraction technology of total flavonoids. Agrimonia Pilosa Chem Ind Forest Products 2002;3:62–4.
27. Sha M, Zhang DF, Meng XS, Cao AM. Quality evaluation of Chinese materia medica Sanguisorbae by DNA fingerprinting and HPLC fingerprinting. Chin Pharm J 2002;11:815–17.
28. Jiangsu New Medicinal College. Dictionary of Traditional Chinese Herb. Shanghai: Publishing House of Shanghai Science and Technology, 1985. |
